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小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit

商品貨號：BJ002201

商品庫存： 100
商品品牌：邦景/BHBT
上架時間：2014-09-10

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本試劑盒僅供研究使用。
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)。用純化的小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)，再與 HRP 標記的小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)抗體結合，形成抗體抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)濃度。

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit安全性：
1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
試劑盒的組成：

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit樣品收集、處理及保存方法：
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，10×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能
不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片：將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化：切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復：根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復，
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉：滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉：滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉：滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
12.加 HRP-SA：滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；
16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit操作注意事項：
1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒Mouse Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase, pAMPK ELISA Kit保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月

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